自备产品

基础培养基 /血清+双抗/PBS/显微剪刀/离心管/培养板/培养皿/100um 细胞筛网/1ml吸头/巴氏吸管

实验步骤（仅参考）

准备工作：完全培养基配制；10ml血清+90ml基础培养基+1ml双抗

1、取出眼球，在75%的酒精中浸泡3-5分钟。

2、浸泡后眼球，放入培养皿中，分别去除角膜，晶状体等，取下视网膜。

3、视网膜在无菌的pbs里洗2次。

4、将视网膜转入无菌的皿或者板子中，加入500ul消化液I，用显微剪将组织剪碎。放入37度培养箱中，每10分钟可以吹打一次。30分钟后，取出皿或者板子。

5、将消化液转入离心管中，加入一定量的pbs ，350g 离心5分钟。

6、取上清（组织块继续保留，第7步需要用）。上清离心，转速1500g  3分钟，离心后弃上清，加入好10%血清的培养基，里面含有我们需要的细胞。

7、在第6步中的沉淀，加入1ml消化液II，使组织重悬。放入37度培养箱，每10分钟可混匀1次，30分钟后取出。加入1ml终止液。

8、用100um或者75um的细胞筛网，把细胞过滤到板子或者培养皿里。此过程可以用基础培养基多冲洗组织，也可以用细胞悬液反复冲洗。

9、收集过滤的细胞悬液，合并前面第6步所得细胞，转速1500g  3分钟，弃上清 ，沉淀即我们需要的视网膜单个细胞。客户可根据自己实验加入对应液体稀释，如果需要培养RPE细胞，可以用含有10%血清的MDEM/F12稀释。

注意事项：

1、以上所有产品均需要无菌，包括自备产品。

2、如果需要做培养，所有操作都需要在超静台中完成。

3、试剂盒在4度下只能保存1个月左右，如果发现有絮状沉淀，建议不要使用，可能已经污染。

本产品在文章中的写法：

英文： Dowobio （Shanghai，China）

中文： 上海多沃生物科技有限公司  Dowobio，上海